24 Сен, 2018

Механизм окислительного стресса

39. Радиолиз воды. Общая схема окислительного стресса.

Т.к. живая материя на 70-90% состоит из воды, то большая часть энергии ионизирующего излучения первично поглощается именно молекулами воды. Воздействие продуктов радиолиза воды на биомолекулы лежит в основе косвенного действия ионизирующего излучения.

Механизм радиолиза воды (общая схема окислительного стресса):

1. При воздействии ионизирующего излучения в воде идут процессы ионизации или возбуждения.

а) ионизация — из молекулы воды выбивается электрон и образуется положительно заряженная молекула воды:

б) возбуждение — если энергии для ионизации недостаточно, образуется возбужденная молекула воды:

2. Освободившийся при ионизации молекулы воды электрон [1] постепенно теряет свою энергию и может быть захвачен другой молекулой воды, которая превращается в отрицательно заряженную молекулу воды:

3. Все перечисленные первичные продукты взаимодействия молекулы воды с излучением (H2O + ,H2O — ,H2O*) являются нестабильными и могут распадаться с образованием ионов и свободных радикалов:

4. Выбитый электрон может окружить себя четырьмя молекулами воды и превратиться в гидратированный электрон e — aq,а затем может быть захвачен молекулойH2O + с образованием возбужденной молекулы воды:

Возбуждённая молекула воды распадается на атомарный водород H ? и гидроксильный радикалOH ? , которые далее могут реагировать друг с другом. Это, в первую очередь, касается радикаловH ? иOH ? , образующихся при распадеH2O*, после реакции [2]:

5. Образовавшиеся радикалы могут:

а) вступать в реакцию с другими молекулами воды:

б) вырывать атом водорода из органических молекул, превращая их в радикалы:

в) реагировать с молекулами растворенного кислорода с образованием перекисных радикалов, обладающих высокой реакционной способностью:

В целом для продуктов радиолиза воды наиболее характерны реакции окисления или восстановления субстрата, образования радиотоксинов. К окислителям относят следующие продукты радиолиза воды: ОН ? , Н2О2, НО2 ? , О2 ? , к восстановителям: Н ? ,e — aq . Образование радиотоксинов происходит в результате реакции с хиноном и убихиноном.

40. Радиационная биохимия нуклеиновых кислот,белков,липидов. Основные типы репарации днк.

На ядерную ДНК приходится около 7% поглощенной дозы.

Механизм повреждения нуклеиновых кислот:

а) при прямом действии ионизирующих излучений на нуклеиновые кислоты: выбивание электрона и последующая миграция дефектного участка по полинуклеотидной цепи (несколько сотен азотистых оснований) до участка с повышенными электрон-донорными свойствами (чаще всего до участка локализации тимина или цитозина, где и образуются свободные радикалы этих оснований).

б) при косвенном действии ионизирующих излучений на нуклеиновые кислоты: взаимодействие с продуктами радиолиза воды приводит к образованию свободных радикалов, что ведет к нарушению структуры ДНК, в основе которого лежат следующие механизмы:

— одно- и двунитевые разрывы;

— модификация азотистых оснований;

— образование тиминовых димеров;

— сшивки ДНК–ДНК, ДНК-белок.

При дозе 1 Гр в каждой клетке человека повреждаются около 5000 азотистых оснований, возникают примерно 1000 одиночных и от 10 до 100 двойных разрывов. Определенное число одиночных разрывов образуется даже при малых дозах излучения, но они не приводят к поломкам молекулы ДНК, т.к. куски поврежденной молекулы прочно удерживаются на месте водородными связями с комплементарной нитью ДНК и хорошо поддаются восстановлению.

Репарация повреждений в ДНК.

Все механизмы репарации в клетке многократно продублированы и могут идти разными путями, находящимися под генетическим контролем. Репарация может быть как практически безошибочной (фотореактивация и эксцизионная репарация коротких участков), так и зачастую ошибочной (SOS-репарация, т.к. она является попыткой восстановить структуру ДНК любой ценой при серьезных массивных повреждениях).

Репарация генетических повреждений обеспечивается десятками ферментов, многие из которых участвуют также в процессах репликации и рекомбинации.

Основные группы ферментов репарации:

1. нуклеозидазы — производят выщепление оснований по N-гликозидной связи с образованием АП-сайтов — апуриновых или апиримидиновых участков;

2. инсертазы — производят встраивание оснований в АП-сайты;

3. лиазы — производят расщепление пиримидиновых димеров;

4. эндонуклеазы — проводят инцизию — разрез ДНК возле повреждения;

5. экзонуклеазы — проводят эксцизию — удаление поврежденного участка;

6. ДНК-полимеразы — проводят синтез ДНК по комплементарной матрице;

7. ДНК-лигазы — производят сшивку нуклеотидов.

Основные типы репарации ДНК:

а) фотореверсия — происходит за счет работы фотолиаз, причем начальный этап — образование фермент-субстратного комплекса — может идти и в темноте: E+S?ES+h??E+P, где Е – фермент (энзим),S– субстрат,P- продукт реакции. Для работы фотолиазы требуется свет с длиной волны ? 350 нм.

1. Повреждение ДНК с образованием димера под действием УФИ

2. Образование фермент-субстратного комплекса с фотолиазой:

3. Восстановление структуры ДНК:

б) восстановление одиночных разрывов — происходит с участием ДНК-лигаз, характерна при действии ионизирующих излучений, вызывающих образование большого числа однонитевых разрывов ДНК.

Этапы восстановления одиночных разрывов:

1. Повреждение ДНК с образованием одиночного разрыва:

2. Образование фермент-субстратного комплекса с ДНК-лигазой:

в) восстановление структуры азотистых оснований — удаление лишних метильных групп, восстановление разрывов циклических структур;

г) замена азотистых оснований — протекает с участием ДНК-гликозидаз.

II. Репарация с использованием комплементарной цепи (эксцизионная репарация).

Наиболее изученный вид эксцизионной репарации — “темновая репарация”. Ее основные этапы:

1. Incisio (разрезание) — эндонуклеаза «узнает» поврежденный участок и производит разрез:

2. Excisio (вычленение) -экзонуклеаза удаляет повр-ый участок:

3. Sintesis- репаративный синтез с помощью ДНК-полимеразы:

4. Сшивка восстановленных участков ДНК-лигазой:

III. Репарация с использованием межмолекулярной информации:

а) восстановление двойных разрывов — возможно в том случае, когда имеется копия генетической информации (например, при диплоидном наборе хромосом). В основе данной репарации — сложный процесс рекомбинации с реципрокным обменом нитей ДНК и последующим восстановлением повреждений. При этом образуются так называемые «структуры Холидея», которые в дальнейшем подвергаются разделению с образованием 2 нормальных нитей ДНК.

б) репарация поперечных сшивок внутри ДНК — происходит по схеме “выщепление-рекомбинация-синтез”.

IV. Индуцибельная репарация.

а) SOS-репарация — запускается в клетке при наличии сигнала бедствия — появления свободных фрагментов полинуклеотидной цепи, что указывает на серьезные повреждения ДНК. При этом клетка пытается восстановить структуру ДНК, невзирая на степень ее повреждения. Достигается это снижением 3’-5’ — корректорской функции ДНК-полимеразы, что помогает быстро, но не всегда безошибочно восстанавливать структуру.

б) постадаптационная репарация — механизм до конца не известен; впервые описана при исследовании культуры лимфоцитов, которые обладают повышенной чувствительностью к воздействию ионизирующих излучений: после предварительного облучения культуры лимфоцитов при суммарной дозе около 30 сГр с низкой интенсивностью в течение 4 часов развивалась повышенная устойчивость к повреждению ДНК, длившаяся около 66 часов (3 клеточных цикла).

Механизмы репарации генетических повреждений — сложная продублированная система защиты генетической информации клетки, основа обеспечения надежности биологических систем. Большинствоодиночных разрывоврепарируются даже в летально облученных клетках и не являются причиной, определяющей гибель клетки. Однако нерепарированные одиночные разрывы могут в последующем привести к образованиюдвойных разрывов, плохо поддающихся восстановлению. Двойные разрывы могут возникнуть в результате единичного акта ионизации либо при совпадении одиночных разрывов на комплементарных нитях, они опасны для клетки, т.к. они не всегда поддаются репарации и служат непосредственной причиной возникновения хромосомных аберраций.

Виды хромосомных аберраций:

1. фрагментация хромосом

2. образование хромосомных мостов, дицентриков, кольцевых хромосом

3. появление внутри- и межхромосомных обменов.

Часть аберраций (хромосомные мосты и др.) механически препятствуют делению клетки, некоторые аберрации (внутри- и межхромосомные обмены, ацентрические фрагменты) приводят к неравномерному разделению хромосом и утрате генетического материала, что вызывает гибель клеток из-за недостатка метаболитов, синтез которых кодировался утраченной частью.

Действие ионизирующих излучений на белки.

До 20% поглощенной энергии связано с повреждением белков.

Механизм повреждения белков:

а) при прямом действии ионизирующих излучений: из молекулы белка выбивается электрон и образуется дефектный участок, который мигрирует по полипептидной цепи за счет переброски соседних электронов до тех пор, пока не достигнет участка с повышенными электрон-донорными свойствами. В этом месте в боковых цепях аминокислот возникают свободные радикалы.

б) при косвенном действии ионизирующих излучений: образование свободных радикалов происходит при взаимодействии белковых молекул с продуктами радиолиза воды, что влечет за собой изменение структуры белка:

— разрыв водородных, гидрофобных, дисульфидных связей;

— модификация аминокислот в цепи;

— образование сшивок и агрегатов;

— нарушение вторичной и третичной структуры белка.

Такие нарушения в структуре белка приводят к нарушению его функций (ферментативной, гормональной, рецепторной и др.).

Действие ионизирующих излучений на липиды.

Под влиянием облучения происходит процесс перекисного окисления липидов — образование свободных радикалов ненасыщенных жирных кислот, которые при взаимодействии с кислородом образуют перекисные радикалы, а они, в свою очередь, реагируют с нативными жирными кислотами.

Действие ионизирующих излучений на мембранные структуры клетки.

Так как липиды — основа биомембран, то перекисное окисление повлечет за собой изменение их свойств. Клетка — система взаимосвязанных мембран и многие процессы клеточного метаболизма проходят именно на мембранах, поэтому при повреждении мембран в клетке нарушаются биохимические процессы и энергетический обмен (из-за повреждения митохондрий), происходит сдвиг ионного баланса клетки (выравнивание концентраций натрия и калия вследствие сдвига ионного баланса клетки).

Действие ионизирующего излучения на углеводы.

Углеводы в целом достаточно устойчивы к действию ионизирующего излучения:окислительный распад, укорочение цепи и отщепление альдегидов от простых сахаров наблюдаются при дозах порядка 1000 Гр. Из продукта распада углеводов — глицеринового альдегида — синтезируется метилглиоксаль — вещество, ингибирующее синтез ДНК и белка, и подавляющее деление клеток. Чувствительна к облучению и гиалуроновая кислота, являющаяся составным элементом соединительной ткани: уже при дозе облучения около 10 Гр наблюдается значительное снижение ее вязкости, а при больших дозах – изменение структуры, связанное с отщеплением гексозамина и гексуроновых кислот.

studfiles.net

Молекулярные механизмы влияния окислительного стресса на белки-регуляторы апоптоза тема диссертации и автореферата по ВАК 14.00.16, кандидат медицинских наук Старикова, Елена Григорьевна

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Старикова, Елена Григорьевна

Список использованных сокращений

Глава 1. Обзор литературы. Современные представления о молекулярных механизмах, учавствующих в регуляции апоптоза клеток

1.1. Феноменология апоптотической гибели клеток

1.1.1. Молекулярные механизмы реализации апоптоза

1.1.2. > Редокс-регуляция програмированной клеточной гибели

1.2. Пути активации и мишени воздействия транскрипционных факторов

1.2.1. Роль транскрипционного фактора в жизнедеятельности клетки 24 1.2.1.1. Классический, альтернативный и другие пути активации транскрипционного фактора МБ-кВ 241.2.1.2. Исходы активации МЧсВ

1.2.2. Транскрипционный фактор р

1.2.2.1. Модели р53 активации

1.2.2.2. Нижележащие мишени р53 активации •

1.3. Роль белков семейства Вс1-2 в реализации апоптотической программы клетки

1.3.1. Антиапоптотические белки-регуляторы программированной клеточной гибели

1.3.2. Проапоптотические белки семейства Вс1-2, участвующие в регуляции апоптотической гибели клеток

1.3.3. Молекулярные основы взаимодействия между подклассами протеинов семейства Вс1

Введение диссертации (часть автореферата) На тему «Молекулярные механизмы влияния окислительного стресса на белки-регуляторы апоптоза»

Актуальность исследования. Нарушения реализации программированной гибели клеток являются важным патогенетическим фактором развития социально значимых заболеваний человека ( злокачественные новообразования, сердечно-сосудистые и нейродегенеративные заболевания, острые и хронические воспалительные процессы, сахарный диабет и др.), что обусловливает интенсивность исследований, посвященных установлению молекулярных механизмов ее дизрегуляции . В норме апоптотическая гибель необходима для поддержания тканевого гомеостаза за счет устранения избыточных и/или функционально неполноценных клеток. Реализация суицидальной программы зависит от баланса про- и антиапоптотических систем в клетке и регулируется комплексом генетических, молекулярных и биохимических факторов, большинство из которых полностью не верифицировано [Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В., 2002; Фильченков A.A., 2003; Рязанцева Н.В. и соавт ., 2006].

В последние годы особое внимание уделяется роли окислительного стресса в развитии апоптоза . Универсальность явления программированной гибели позволяет предположить участие активных форм кислорода ( АФК ) в регуляции другого типового механизма регуляции клеточного гомеостаза -апоптоза [Cai Н., Harrison D.G., 2000; Зенков Н.К. и соавт., 2001; Ляхович В.В. и соавт., 2005].

АФК обладают высокой реакционной способностью, позволяющей им взаимодействовать с липидами , белками, нуклеиновыми кислотами и углеводами. В высоких концентрациях АФК индуцируют процессы перекисного окисления липидов в биологических мембранах, повреждение мембраносвязанных белков и ДНК клетки, инактивацию ферментов [Alder V.et al.,1999; Дубинина Е.Е., 2001; Zhu H.et al., 2001]. Однако в настоящее время концепция, предполагающая исключительно повреждающее влияние АФК на функционирование клетки, пересматривается. Широкую известность приобрел термин « окислительная регуляция », отражающий активную роль окислительно-восстановительной модификации протеинов в регуляции функции клетки [Kim

B.Y. et al., 2001; Haddad J., 2002]. Измененные в результате воздействия АФК молекулы являются « сигналами », несущими биологическую информацию, необходимую для регуляции различных клеточных функций, в частности, апоптоза [Sorescu D., 2001; Safa О., 2001; Октябрьский О.Н., Смирнова Г.В., 2007].

АФК влияют на различные пути инициации апоптотической программы (митохондриальный, рецепторный, ядерный) непосредственно или через внутриклеточные редокс-зависимые сигнал-передающие системы [Меньшикова Е.Б. и соавт., 2006]. При воздействии стрессового стимула в клетке может происходить одновременная- активация * нескольких молекулярных путей, взаимодействующих между собой [Wajant Н., 2002; Schultz D.R. Harrington W.G., 2003]. Интеграция различных вариантов запуска апоптоза может происходить на уровне транскрипционных факторов. Одним из редокс-чувствительных транскрипционных факторов является МР-кВ [ Меныцикова Е.Б. и соавт., 2006]. Данный фактор транскрипции вовлечен в регуляцию воспалительного ответа (синтез IL-2, -8), опухолевую прогрессию, в частности, за счет влияния на реализацию апоптотической программы [Stark L.A., Dunlop M.G., 2005; Perkins N.D., Gilmore T.D., 2006]. К транскрипционным-мишеням NF-kB относят гены, кодирующие белки Bcl-XL, IAP, Al, ответственные за угнетение процесса апоптоза [Kucharczak J. et al., 2003].

АФК могут изменять соотношение между про- и антиапоптотическими протеинами семейства Вс1-2, являющимися ключевыми регуляторами программированной гибели клеток. Известно, что синтез ряда белков данного семейства находится под контролем редокс-чувствительных транскрипционных факторов, в частности, р53 активирует экспрессию Bid, Puma и Noxa; NF-kB -Bcl-XL [Oda E. et al., 2001; Sax J.K. et al., 2002; Kucharczak J. et al., 2003].

Таким образом, АФК, являясь вторичными мессенджерами , могут изменять функционирование клетки вплоть до запуска в ней суицидальной программы. Учитывая ключевую роль дизрегуляции апоптоза в патогенезе ряда распространенных заболеваний человека, изучение роли окислительного стресса в механизмах изменения реализации программированной гибели клеток позволит создать новые патогенетически-обоснованные технологии терапии социально значимых заболеваний.

Цель исследования: установить молекулярные механизмы модификации редокс-чувствительных белков-регуляторов апоптоза при окислительном стрессе.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Определить содержание проапоптотических (Вах, Bad) и антиапоптотических (Bcl-2, Bcl-XL) белков-регуляторов апоптоза в мононуклеарных лейкоцитах при окислительном стрессе in vitro.

2. Установить роль факторов транскрипции (NF-kB, р53) в нарушении регулирующего влияния про- и антиапоптотических белков семейства Вс1-2 в мононуклеарных лейкоцитах крови при окислительном стрессе in vitro.

3. Оценить влияние дисбаланса окислительного метаболизма на экспрессию м-РНК белков-регуляторов апоптоза в мононуклеарных лейкоцитах крови .

4. Установить молекулярные механизмы дизрегуляции программированной гибели мононуклеарных лейкоцитов крови, реализуемые на уровне транскрипционных факторов, при остром воспалительном процессе.

Научная новизна. Впервые установлено, что активация редокс-чувствительных факторов транскрипции NF-kB и р53 вовлечена в дизрегуляцию апоптоза при окислительном стрессе. Получены приоритетные данные о дисбалансе содержания про- и антиапоптотических белков семейства Вс1-2 в условиях повышенной продукции АФК. Показано, что нарушение системы про-и антисуицидальных протеинов семейства Вс1-2 опосредовано влиянием факторов транскрипции NF-kB и р53 на экспрессию соответствующих генов-мишеней. Установлены однотипные механизмы дигрегуляции программированной гибели мононуклеарных лейкоцитов крови при экспериментальном окислительном стрессе, индуцированном 1 мМ перекисью водорода, и остром воспалении .

Теоретическая и практическая значимость. Полученные в результате проведенного исследования фактические данные описывают молекулярные механизмы дизрегуляции программированной гибели мононуклеарных лейкоцитов при экспериментальном окислительном стрессе и при остром воспалении. Установлена роль факторов транскрипции р53 и NF-kB в регуляции экспрессии генов белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2. Основные положения исследования могут служить основой для дальнейшего изучения редокс-чувствительных механизмов регуляции клеточных функций, поиска молекулярных мишеней, подверженных воздействию активных форм кислорода. Результаты проведенного исследования позволят разработать новые технологии коррекции нарушений программы клеточной гибели при заболеваниях, сопровождающихся дисбалансом окислительного метаболизма.

Положения, выносимые на защиту:

1. При окислительном стрессе в клетках имеет место дисбаланс белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2: повышение содержания проапоптотического белка Вах, отсутствие изменения содержания антисуицидальных белков Вс1-2 и Bcl-XL.

2. Воздействие активных форм кислорода на редокс-чувствительные элементы сигнал-передающих путей приводит к изменению экспрессии генов, кодирующих белки-регуляторы апоптоза семейства Вс1-2.

3. Активация факторов транскрипции р53 и NF-kB при окислительном стрессе in vitro приводит к изменению профиля экспрессии генов, находящихся под контролем данных транскрипционных факторов.

4. Дисбаланс окислительного метаболизма при острых воспалительных заболеваниях сопровождается дизрегуляцией апоптоза за счет активации редокс-чувствительных факторов транскрипции, влияющих на экспрессию генов белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2.

Апробация и внедрение результатов работы. Результаты проведенных исследований докладывались и обсуждались на VIII Международном конгрессе молодых ученых и специалистов « Науки о человеке » (Томск, 2007), III Всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007), Межгородской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии » (Санкт-Петербург, 2007), Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицины » (Абакан, 2007).

Исследования поддержаны Советом по грантам при Президенте РФ для поддержки ведущих научных школ РФ в рамках проекта «Молекулярные основы нарушения гомеостаза клеток при актуальных заболеваниях инфекционной и неинфекционной природы» (НШ-4153.2006.7), РФФИ -«Молекулярные механизмы управления программированной гибелью клеток с использованием регуляторных молекул» (№ 07-04-12150), а также выполнены в рамках ФЦНТП (проект «Разработка способов коррекции нарушений регуляции апоптоза клеток при патологических процессах в условиях окислительного стресса», государственный контракт № 02.442.11.7276 от 20.02.2006 г).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, из них 1 — в центральном рецензируемом журнале, рекомендованном ВАК .

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Старикова, Елена Григорьевна

1. Окислительный стресс, индуцированный in vitro 1 мМ перекисью водорода и развивающийся при остром воспалении, сопровождается увеличением числа апоптотически измененных мононуклеарных клеток крови.

2. Воздействие активных форм кислорода на мононуклеарные лейкоциты сопровождается повышением содержания в клетках проапоптотического белка Вах, не приводит к изменению содержания антисуицидальных белков Вс1-2 и Bcl-XL, проапоптотический белок Bad в клетках отсутствует.

3. В условиях экспериментального окислительного стресса повышается экспрессия генов bcl-XL и Ьах, экспрессия мРНК гена bcl-2 не изменяется; ген bad при окислительном стрессе in vitro не экспрессируется.

4. При культивировании мононуклеарных лейкоцитов крови в присутствии 1 мМ перекиси водорода происходит активация транскрипционных факторов р53 и NF-kB, приводящая к изменению экспрессии генов-мишеней bcl-XL и Ьах.

5. При острых воспалительных заболеваниях имеет место дисбаланс белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2 (увеличение содержания Вах без изменения уровня Вс1-2 и Bcl-Хц) на фоне повышенной экспрессии мРНК генов bcl-XL и Ьах и активации фактора транскрипции NF-kB.

6. Влияние активных форм кислорода на апоптотическую программу мононуклеарных лейкоцитов опосредовано редокс-чувствительными транскрипционными факторами и приводит к дизрегуляции программированной гибели клеток за счет изменения соотношения белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2.

Накопленные к настоящему времени данные экспериментальных молекулярно-биологических исследований свидетельствуют о наличии сложных механизмов регуляции апоптоза. Большое внимание уделяется влиянию АФК на различные звенья внутриклеточных сигнал-передающих путей, участвующих в реализации программированной клеточной гибели. Так, известно более 20 редокс-чувствительных транскрипционных факторов, под воздействием которых происходит изменение экспрессии генов, кодирующих белки с разнообразными функциями, обусловливая комплексный ответ клетки на действие внешних раздражителей.

В регуляции апоптоза особая роль отводится редокс-зависимому транскрипционному фактору р53, индукция которого может приводить к аресту деления, старению и гибели клетки. Учитывая, что недостаточность функции р53 часто сопровождается признаками дизрегуляции программированной гибели клеток, было предложено несколько теорий, объясняющих различные исходы активации данного транскрипционного фактора. По одной из них, апоптоз реализуется при достижении количества вновь синтезированного (в условиях воздействия стрессового стимула) протеина р53 определенного порогового уровня. По другим данным, изменение профиля экспрессии генов-мишеней может быть обусловлено посттрансляционной модификацией р53, в частности, при фосфорилировании МАР-киназами или в условиях воздействия АФК. На настоящий момент нет четко сформулированной гипотезы, позволяющей предугадать ответ клетки при активации р53 и, следовательно, не сформулированы технологические подходы, позволяющие корректировать данный ответ.

Другим редокс-чувствительным транскрипционным фактором, задействованным в регуляции программированной гибели клеток, является кВ. Под контролем данного фактора транскрипции находятся- гены, кодирующие белки с антиапоптотической функцией. Сложность изучения функции МБ-кВ заключается в многообразии путей, по которым возможна его активация. Существует гипотеза, предполагающая, что в зависимости от варианта индукции МБ-кВ последний может репрессировать свои антиапоптотические гены-мишени.

Судьба клетки (выживание или гибель) > определяется на уровне взаимодействия про- и антиапоптотических белков семейства1 Вс1-2. Синтез данных протеинов-находится под контролем факторов транскрипции и является высоко регулируемым процессом. Однако соотношение вновь синтезированных белков может изменяться в результате их взаимодействия друг с другом, в частности, ВИЗ-белки могут потенцировать функцию проапоптотических (Вах, Вак) протеинов и-угнетать антиапоптотические свойства Вс1-2, Вс1-ХЬ и В’с1-\у. Баланс между про- и- антисуицидальными’ членами семейства Вс1-2 определяет выживаемость клеток и зависит от множества факторов (транскрипционной. активности генов, редокс-зависимой посттрансляционной модификации- или белок-белковых взаимодействий друг с другом).

Индукция или ингибирование активности апоптоза, как ведущего механизма ограничения пролиферации клеточных популяций, может лежать в основе развития ряда заболеваний. Острое воспаление является одним из примеров патологических процессов, характеризующихся как дисбалансом окислительного метаболизма , так и нарушениями реализации апоптоза. Излишняя активация апоптотической гибели клеток может приводить к истощению защитных сил организма, в то время, как ее ингибирование, — к хронизации воспалительного процесса. Основные эффекторные молекулы воспалительной реакции,- АФК, обеспечивая микробицидное, фугицидное и цитотоксическое действие, могут изменять жизнедеятельность всех клеток организма. В связи с этим особый интерес представляет изучение воздействия АФК на реализацию апоптоза клеток, не принимающих непосредственного участия в развитии воспаления . Подходящей клеточной моделью для данной цели являются мононуклерные лейкоциты крови. Благодаря наличию ядра, для них характерна реализация апоптотической гибели с участием основных сигнал-передающих путей.

Учитывая сложность клеточного ответа на изменение условий жизнедеятельности, для нас в рамках проводимого исследования представлялось целесообразным выявить потенциальные мишени воздействия АФК для поиска патогенетически обоснованных подходов терапии заболеваний, сопровождающихся окислительным стрессом.

Глава 2; Материал и методы исследования 2.1. Материал исследованияj

Для реализации предпринятого нами исследования были выделены экспериментальный и клинический блоки, включавшие манипулирование in vitro мононуклеарными лейкоцитами, полученными у здоровых доноров и больных острыми воспалительными заболеваниями.

Вf исследование были включены 46 здоровых доноров в возрасте от 18 до 50 лет ( мужчины — 20, женщины — 26). Обследовали 49 больных-(25 мужчини<24 женщины в возрасте от 18 до 50 лет, средний возраст — 32±3 лет) с острыми! воспалительными заболеваниями (внебольничная пневмония, острый аппендицит ). Пациенты были обследованы при госпитализации в терапевтическое и хирургическое отделения ММЛПУ Городская больница- №1 (главный врач — С.М. Кирютенко), и госпитальные клиники-ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (главный врач — Заслуженный врач РФ, к.м.н. В.М. Шевелев ); клиники Военно-медицинского госпиталя (зав; кафедрой терапии — и усовершенствования врачей — к.м.н., доц. Т.С. Агеева ).

Критериями исключения для здоровых доноров и больных острыми воспалительными, заболеваниями являлись возраст моложе 18 и старше,:50 лет; период обострения хронических воспалительных заболеваний; аутоиммунные, наследственные и психические болезни , алкогольная и наркотическая зависимости.

Материалом для исследования служила венозная кровь, взятая утром натощак из локтевой вены в количестве 10 мл и стабилизированная гепарином (25 Ед/мл).

Исследование проводилось на базе Межкафедральной научно-образовательной лаборатории молекулярной- медицины — ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (зав. лабораторией — к.м.н. JI.C. Литвинова ), лаборатории фармакогеномики НИИ химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (г. Новосибирск) (зав. лабораторией — М.Л. Филипенко ).

2.1.1 Экспериментальный блок исследования

Экспериментальная модель в медицинской науке служит средством, позволяющим устанавливать взаимосвязи между теорией и опытом [ Веденов А. А., 1988]. Окислительный стресс in vitro может быть воспроизведен с использованием различных модельных систем (инкубация клеток с оксидом мышьяка, перекисью водорода, в ксантин-ксантиноксидазной реакции) [ Заббарова И.В. и соавт., 2004; Плетюшкина О.Ю: и соавт ., 2006]. Использование перекиси водорода в качестве индуцирующего окислительный стресс агента имеет ряд преимуществ. Известно, что Н202 образуется в клетке в физиологических условиях, а увеличение ее внутриклеточной продукции является важным компонентом адаптивных реакций. При добавлении экзогенной Н2О2 в среду инкубации исследуемых клеток перекись водорода способна легко проникать через гидрофобные мембраны, благодаря свойству электростатической нейтральности. По данным* литературы, перекись водорода (от 10’мкм до 10 мМ) вызывает изменения в жизнедеятельности разных клеток [ Гамалей И:А., Клыбин И.В., 1998; Тронов В.А., Константинов Е.М., 2000; Скулачев В.П., 2001].

Нами в экспериментальных условиях была определена оптимальная концентрация перекиси водорода, необходимая для индукции апоптоза мононуклерных лейкоцитов. Для этого выделенные мононуклеарные лейкоциты крови культивировали в стерильных пенициллиновых флаконах и 96-луночных круглодонных иммунологических планшетах. Во флаконы и лунки планшетов вносили суспензию клеток, доводили полной культуральной средой до концентрации 2-10б/мл и добавляли перекись водорода в конечной концентрации 10, 50, 100, 500 мкМ и 1 мМ. Концентрация перекиси водорода выше 1 мм (5 мМ) не использовалась, поскольку вызывала появление большого числа неротических клеток, выявляемых при окраске 0,5% трипановым синим («Serva», США). Клетки инкубировали в течение 18 ч при температуре 37° и 5% С02. Указанные концентрации являются, по данным литературы, оптимальными для моделирования влияния окислительного стресса на внутриклеточные процессы [Гамалей И.А., Клыбин И.В., 1998].

2.1.2. Клинический блок исследования

В программу обследования были включены 20 (12 мужчин и 8 женщин) пациентов с диагнозом острый аппендицит. Диагноз острого аппендицита основывался на верификации характерного болевого синдрома, диспепсических расстройств (тошнота, рвота , диарея и др.), общеинтоксикационного синдрома (лейкоцитоз, увеличение СОЭ, повышение температуры тела до 38,5°С), наличии специфического для данной нозологии ‘ комплекса симптомов (перитонеальный симптом Щеткина , симптомы Волковича-Кохера, Ситковского, Ровзига, Воскресенского и др.). Для исключения других острых заболевания брюшной полости проводился широкий спектр лабораторных исследований, включавший биохимическую оценку крови (AJIT, ACT, креатин, общий белок, мочевина, билирубин , а-амилаза), оценку гемостаза, общий анализ мочи и крови.

В клиническую группу пациентов с внебольничной пневмонией были включены 29 человек (13 мужчин и 16 женщин ). Диагноз внебольничной пневмонии был поставлен на основании клинической картины (кашель с отделением мокроты , одышка смешанного характера; повышение температуры тела до 38°С), физикального (перкуссия и аускультация), рентгенологического, бактериологического исследований. У обследованных больных рентгенологически определялось усиление легочного рисунка, выявлялись участки инфильтрации паренхимы легких. Правое и левое легкое были поражены с одинаковой частотой — 13 (44%) и 16 пациентов (56%) соответственно. По данным бактериологических посевов и ПЦР-диагностики, у 40% пациентов определялось инфицирование Mycoplasma pneumoniae, у 60% больных — Pneumococcus (Streptococcus pneumoniae). Всем пациентам при поступлении в стационар назначались анализы, включающие биохимическую оценку крови (AJIT, ACT, креатин , общий белок, мочевина, билирубин, сх-амилаза), оценку гемостаза , общий анализ мочи и крови.

2.2. Методы исследования

В соответствии с поставленными целью и задачами исследования нами был предложен дизайн, предполагающий разделение^ работы на два последовательных этапа.

На первом этапе исследования проводили оценку выраженности апоптоза мононуклеарных лейкоцитов крови в условиях экспериментального оксилительного стресса и в клинике острого воспаления, состояния ключевых путей инициации программированной гибели клеток; ( рецепторный , митохондрий-опосредованный, ядерный).

На втором этапе исследования для проверки гипотезы- участия- редокс-чувствительных элементов в дизрегуляции апоптоза проводили измерение активности транскрипционных факторов- р53 и NF-kB. Для этого определяли наличие в цитоплазме клеток белковых продуктов1 активации данных транскрипционных факторов, в дальнейшем — оценивали их влияние на экспрессию — генов белков-регуляторов апоптоза- (Bcl-2, Bc1-Xl, Вах и Bad), находящихся под- транскрипционным контролем- указанных молекул. Для’ определения- участия протеинов семейства Вс1-2 в дизрегуляции апоптоза измеряли содержание про- (Вах, Bad) и антиапоптотических (Bcl-2, Bcl-XL) представителей данного семейства в клетках (табл. 1).

2.2.1. Выделение и культивирование мононуклеарных лейкоцитов венозной крови

Мононуклеарные клетки выделяли — из цельной венозной гепаринизированной крови методом градиентного центрифугирования [ Натвиг Дж. и соавт., 1980].

Венозную гепаринизированную кровь (25 Ед/мл) в соотношении 1:1 наслаивали на градиент плотности Ficoll-Paque (р=1,077 г/см3) («GE Healthcare», Швеция) и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 20 мин. Кольцо, образованное из смеси мононуклеарных лейкоцитов, собирали пипеткой с раздела фаз. Клетки трижды отмывали средой RPMI-1640, ресуспендируя и центрифугируя каждый раз в течение 10 мин при 1500 об/мин.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Старикова, Елена Григорьевна, 2008 год

1. Активированные кислородные метаболиты , в монооксигеназных реакциях / В.В. Ляхович , В.А.Вавилин, Н.К. Зенков и соавт . // Бюллетень СО РАМН.-2005.-Т. 118.-№4.-С.7-13.

2. Андреев , А.Ю. Метаболизм активных форм кислорода в митохондриях / А.Ю. Андреев, Ю.А. Кушнарева , A.A. Старков // Биохимия. 2005. -Т.70., вып.2. — С.246-264.

3. Антиоксиданты и атеросклероз: Критический анализ проблемы и направление дальнейших исследований / В.З. Ланкин , А.К. Тихазе, А.И. Каминный и соавт. // Патогенез , 2004 — №1. — С. 71-86

4. Апоптоз и пролиферация как альтернативные формы ответа Т-лимфоцитов на стимуляцию / М. Ф. Никонова, М. М. Литвина , М. И. Варфоломеева и др. // Иммунология . 1999. — №2. — С. 20-23.

5. Барышников , А.Ю. Иммунологические приблемы апоптоза / А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин М.: Эдиториал. — 2002 — 320с.

6. Белецкий , И.П. Пути передачи цитотоксического сигнала рецепторами семейства TNF-Rs (обзор) / И.П.Белецкий, А.Б.Мошникова, О.В.Прусакова’// Биохимия.- 2002. -Т. 67, Вып. 3. С. 343- 353. ¦

7. Болдырев, A.A. Карнозин и защита тканей от окислительного стресса / A.A. Болдырев. М.: Изд-во Диалог-МГУ. — 1999. — 364 с.

8. Бурлакова, Е.Б. Блеск и нищета антиоксидантов / Е. Б. Бурлакова // Наука и жизнь. 2006. — №2. — С. 37-43.

9. Веденов, A.A. "Моделирование элементов мышления"/ A.A. Веденов М.: Наука- 1988.- 108 с.

10. Взаимодействие ферритина и миоглобина как индукторовперекисного окисления липидов , роль активных форм кислорода и азота / И.В. Заббарова , К.Б. Шумаев, А.Ф. Ванин и соавт. //Биофизика. 2004. — Т. 49. -С. 659-665.

11. П.Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы в биологических системах. / Ю.А. Владимиров// Соросовский образовательный журнал. 2000. — Т. 6, № 12.-С13-19.

12. Владимирская , Е. Б. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста / Е. Б. Владимирская, А. А. Масчан , А. Г. Румянцев // Гематология и трансфузиология. 1997. — Т.42, №5. — С. 4-9.

13. Влаопулос, С. JNK: ключевой модулятор внутриклеточной сигнальной системы / С. Влаопулос, B.C. Зумпурлис // Биохимия. 2004. — Т.69. вып.8. — С. 1038-1050.

14. Воейков, B.JI. Био-физико-химические аспекты старения и долголетия // Успехи геронтологии . 2002. — Вып.9. — Т.З. — С.261 -268.

15. Гамалей , И. А. Перекись водорода как сигнальная молекула. / И.А.Гамалей, И.В. Клыбин // Цитология.- 1996.- Т. 38.- N 12. -С. 12331247.

16. Гордеева , A.B. Одноклеточные альтруисты / A.B. Гордеева, Ю.А. Лабас // Природа. -2005. № 6. — С.27-34.

17. Дорохов , Е.В. Апоптоз в нервных клетках и его роль в патогенезе нейродегенеративных заболеваний / Е.В. Дорохов, H.H. Белушкина // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. -2006. -№3.-С.46-51.

18. Казначеев, К. С. Механизмы развития цитокининдуцированного апоптоза / К. С. Казначеев // Гематология и трансфузиология . 1999. — Т. 44, № 1. -С. 40-43.

19. Крыжановский, Г.Н. Дизрегуляционая патология . / Г.Н. Крыжановский // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2002. — №3. -С.2-19.

20. Кулинский, В.И. Активные формы кислорода и окислительная модификация макромолекул / В.И. Кулинский //Соросовский образовательный журнал. 1999. — №1. — С. 2-7.

21. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин М.: Высшая школа, 1980. — 296 с.

22. Лебедев, В.В. Супероксидная теория патогенеза и терапии иммунных расстройств/ В.В. Лебедев // Вестник РАМН : 2004. С 34 -40.

23. Лимфоциты : выделение, фракционирование и характеристика / под ред. Дж. Натвиг и др. М.: Медицина, 1980. — 280 с.

24. Лушников , Е.Ф. Гибель клетки (апоптоз) / Е. Ф. Лушников, Л. Ю. Абросимов . М. : Медицина, 2001. — 192 с.

25. Мазуренко, H.H. Роль вирусов папиллом в канцерогенезе шейки матки // Актуальные вопросы клинической онкологии. -2003- Т.5. -№1. С.34-42.

26. Маянский , А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А. Н. Маянский; Д.-Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1989. — 221 с

27. Меньшикова , Е.Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е.Б. Меньшикова, В.З. Ланкин , Н.К. и соавт. М. •.« Слово », 2006. — 503 с.

28. Мураков , C.B., Митохондриальные мегапоры в жизни клетки / C.B. Мураков, Н.Д. Воспельникова // Вопр. биол. и фарм. химии. 2006. — №2. — С. 42-50.

29. Невницкий, Л.А. Программированная гибель клеток и апоптоз: значение для развития и функционирования иммунной системы / Л. А. Невницкий // Вестник РАМН. 1998. — №6. — С." 43-50.

30. Октябрьский , О.Н. Редокс-регуляция клеточных функций / О.Н. Октябрьский, Г.В. Смирнова // Биохимия. 2007. — Т. 72, вып. 2. — С. 158— 174.

31. Пасечник, И.Н. Окислительный стресс и критические состояния у хирургических больных / И.Н. Пасечник // Вестник интенсивной терапии . -2004.-№3.-С. 27-30.

32. Пероксид водорода, образуемый внутри митохондрий, участвует в передаче апоптозного сигнала от клетки к клетке / О. Ю. Плетюшкина , Е. К. Фетисова, К. Г Лямзаев. и соавт. // Биохимия. — 2006. Т. 71, вып. 1.- С. 75-84.

33. Потапнев , М.П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокинами / М.П.Потапнев // Иммунология. 2002. — №4. — С. 237-243.

34. Роль НАД(Ф)Н-оксидазы в регуляции уровня пролиферативного ответа лимфоцитов на митоген / О.М. Перминова , В.В. Сенюков, Н.Н: Вольский и соавт. // Иммунология. №6 — 2005 — С.42-51.

35. Роль СОД в патогенезе бокового амиотрофического склероза / Захарова М. Н., Завалишин И. А., Болдырев A.A. и соавт // Бюлл . экспер. биол. мед.- 1999.-Т. 127.-С. 460-462.

36. Самуилов , В.Д. Программируемая клеточная смерть / В.Д. Самуилов, A.B. Олескин , Е.М. Лагунова // Биохимия. 2000. — Т.65. — Вып.8. — С.1029-1045.

37. Система Fas-FasL в норме и при патологии / С.Г. Аббасова, В.М. Липкин , H.H. Трапезников / Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.- 1999.- № 3.- С. 3—17.

38. Скулачев, В.П. Н2О2 сенсоры легких и кровеносных сосудов и их роль в антиокисдантной защите организма / В.П. Скулачев // Биохимия. — 2001. — Т.66. — Вып. 10. — С.1425-1429.

39. Состояние системы перекисного окисления липидов у больных ишемической болезнью сердца / В.А. Барсель , И.С. Щедрина, В.Д. Вахляев и соавт. // Кардиология . 1998. — №5. — С.18-20.

40. Талаева , В.В. Механизмы взаимодействия клеток крови и сосудистой стенки в реализации воспалительного и иммунного ответов / В.В. Талаева // Укр. Ревматологический журнал. 2001. — №3. — С.45-53.

41. Тодоров, И.Н. Митохондрии: окислительный стресс и мутации митохондриальной ДНК в развитии патологий, процессе старения и апоптозе / И.Н. Тодоров // Рос.хим. журнал. 2007. — №1. — С. 97-103.

42. Тронов В.А., Константинов Е.М. Репарация ДНК и гибель покоящихся лимфоцитов крови человека, индуцированные перекисью водорода / В.А. Тронов, Е.М. Константинов // Биохимия. 2000. -Т.65. — Вып.11. — с. 1516-1524.

43. Фильченков, АА. Каспазы : регуляторы, апоптоза и других клеточных функций / A.A. Фильченков // Биохимия. 2003.- Т. 68.- Вып.4.- С. 453463.

44. Фрейдлин , И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции / Фрейдлин И.С. // Иммунология. 2001. — №5. — С.4-15.

45. Хансон , К. П. Программированная клеточная гибель (апоптоз) молекулярные механизмы и роль в биологии и медицине / К. П. Хансон // Биохимия. 1997.-Т. 61, вып. 7.-С. 402-412.

46. Чекановская , JT.A. Влияние препарата гамма-плант на продукцию фно-а, ил-1 b и ил-6 мононуклеарами периферической крови человека in vitro / Л.А. Чекановская, A.B. Генералов // Вопр.мед.химии. -2001. №2. — С.73-82.

47. Чеснокова, Н.П. Механизмы структурной и функциональной дезорганизации биосистем под влиянием свободных радикалов / Н.П.

48. Чеснокова, Е.В. Понукалина , М.Н. Бизенкова // Фундаментальные исследования. 2007. — №4. — С.7-18.

49. Чумаков, П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью / П.М. Чумаков // Биохимия. — 2000. — Т.65, вып. 1. — С. 34-47.

50. Ярилин , А.А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии // Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. Б. Б. Мороза.-М., 2001.-С. 13-56.

51. Ярилин, А.А. Апоптоз и его место в иммунных процессах / А.А. Ярилин // Иммунология. 1996,- №6. — С. 10-23.

52. Squamous cell carcinomas and increased apoptosis in skin with inhibited Rel/nuclear factor-kB signaling / M. van Hogerlinden, B.L. Rozell, L. Ahrlund-Richter // Cancer Res. 1999. — Vol. 59.- P. 3299-3303.

53. A conserved domain in Bak, distinct from BH1 and BH2, mediates cell death and protein binding functions / T. Chittenden, C. Flemington, A.B. Houghton et al. // EMBO J.- 1995,- Vol.14.- P.5589-5596.

54. A conserved domain in Bak, distinct from BH1 and BH2, mediates cell death and protein binding functions / T.Chittenden, C.Flemington, A.B. Houghton et al. // EMBO J. 1995. — Vol.14. — P.5589-5596.

55. A novel, high conductance channel of mitochondria linked to apoptosis in mammalian cells and Bax expression in yeast / E.V. Pavlov, M. Priault, D.Pietkiewicz et al //J Cell Biol. 2001. — Vol.155. -P.725-732.

56. A transactivation-deficient mouse model provides insights into Trp53 regulation and function / G.S. Jimenez, M. Nister , J.M. Stommel , M. Beeche et al. // Nat Genet. 2000. — Vol.26. — P.37-43.

57. Accelerated neutrophil apoptosis in mice lacking Al-a, a subtype of the bcl-2-related Al gene / A. Hamasaki, F. Sendo, K. Nakayama et al. // J Exp Med. -1998.-Vol. 188. P.1985-1992.

58. Activated T cell death in vivo mediated by pro-apoptotic Bcl-2 family member, Bim / D.A. Hildeman, Y.Zhu, T.C. Mitchell et al // Immunity. 2002. -Vol.16.-P.759-767.

59. Activation of nuclear factor kB and Bcl-x survival gene expression by nerve growth factor requires tyrosine phosphorylation of IkB / N.T. Bui, A. Livolsi, J.F. Peyron et al. //J. Cell. Biol.-2001.-Vol. 152.-P.753-764.

60. Adams, J.M. Ways of dying: multiple pathways to apoptosis / Adams JM. // Genes Dev. 2003. — Vol.17. — P. 2481-2495.

61. AIF deficiency compromises oxidative phosphorylation / N. Vahsen, C. Cande, J.J. Briere et al. // J. EMBO.- 2004.- Vol. 23.- P. 4679-4689.

62. Alarcon-Vargas, D. p53-Mdm2

the affair that never ends / D. Alarcon-Vargas, Z. Ronai // Carcinogenesis. 2002. — Vol.23. — P.541-547.

63. Analysis of p53-regulated gene expression patterns using oligonucleotide arrays / R. Zhao , K. Gish , M. Murphy , Y. Yin , D. Notterman , W.H. Hoffman , E. Tom , D.H. Mack , A.J. Levine // Genes Dev. 2000. — Vol.8: -P.981-993.

64. Analysis of the pathways of nitric oxide utilization in mitochondria / E. Cadenas, J.J. Poderoso, F. Antunes et al. // Free Radic Res.- 2000,- N.6.- P. 747-756.

65. Annexin V-affinity assay: a review on an apoptosis detection system based on phosphatidylserine exposure / M. Van Engeland, L. J. W. Nieland, F. C. S. Ramaekers et al. // Cytometry. 1998. — Vol. 31. — P. 1-9.

66. Apaf-l is a transcriptional target of p53 in DNA damage-induced apoptosis / A.I. Robles, N.A. Bemmels, A.B. Foraker, C.C. Harris // Cancer Res. 2001. -Vol.61.-P.6660-6664.

67. Apoptosis regulator Bcl-w is essential for spermatogenesis but appears otherwise redundant / C.G. Print, K.L. Loveland, L. Gibson et al. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1998. Vol.95. — P. 12424-12431.

68. Appella, E. Post-translational modifications and activation of p53 by genotoxic stresses / E. Appella, C.W. Anderson // Eur. J. Biochem. 2001. — Vol.268. -P.2764-2772.

69. Ashkenazi, A. Death receptors: signaling and modulation / A. Ashkenazi, V. M. Dixit//Science.- 1998.-Vol.281.- P. 1305-1308.

70. Association of Bax and Bak homo-oligomers in mitochondria. Bax requirement for Bak reorganization and cytochrome c release / V. Mikhailov, M. Mikhailova, K. Degenhardt et al. // J Biol Chem. 2003. — P.278. — P.5367-76.

71. Autocrine T-cell suicide mediated by APO-l/(Fas/CD95) / J. Dhein, H. Walczak, C. Baumler et al. //Nature.- 1995. -N2.- 438^41.

72. Bad-deficient mice develop diffuse large B cell lymphoma / A.M.Ranger, J. Zha, H.Harada et al. // Proc Natl Acad Sei USA.- 2003. Vol.100. -P.9324-9329.

73. Bax and Bak can localize to the endoplasmic reticulum to initiate apoptosis / W.X. Zong, C. Li, G. Hatzuvassiliou et al. // J Cell Biol. 2003. — Vol.162. -P. 59-69.

74. Bax and Bak coalesce into novel mitochondria-associated clusters during apoptosis / A. Nechushtan, C.L. Smith, I. Lamensdorf et al. // J Cell Biol. -2001.-Vol.153.-P.1265-1276.

75. Bax is present as a high molecular weight oligomer/complex in the mitochondrial membrane of apoptotic cells / B. Antonsson, S. Montessuit, B. Sanchez, et al. // J. Biol. Chem.- 2001.- Vol. 276.- P. 11615-11623.

76. Bax oligomerization in mitochondrial membranes requires tBid (caspase-8-cleaved Bid) and a mitochondrial protein / X. Roucou, S. Montessuit, B. Antonsson et al. // Biochem J. 2002. — Vol.368. — P.915-921.

77. Bcl-2 and Bax regulate the channel activity of the mitochondrial adenine nucleotide translocator / C. Brenner, H. Cadiou, H.L.Vieira et al. // Oncogene. -2000.- Vol. 19.- P.329-336.

78. Bcl-2 familt members and functional electron transport chain regulate oxygen-deprivation-induced cell death /D.S. McClintock, M.T. Santore, V.Y. Lee et al. //Moll. Cell Biol. 2002. — Vol.22.- T.l. -P.94-104.

79. Bcl-2 phosphorylation required for anti-apoptosis function / Ito T., Deng X., Carr B. et al. // J. Biol. Chem. 1997. — Vol.272. — P. 11671-11673.

80. Bcl-2 prevents Bax oligomerization in the mitochondrial outer membrane / V. Mikhailov, M. Mikhailova, D.J. Pulkrabek et al. // J Biol Chem. 2001. -Vol.276.-P. 18361-18374.

81. Bcl-2, Bcl-xL sequester BH3 domain-only molecules preventing Bax- and Bak-mediated mitochondrial apoptosis / E.H. Cheng, M.C. Wei, S. Weiler et al. // Mol Cell. 2001. -Vol. 8. — P.705-711.

82. Bcl-x prevents apoptotic cell death of both primitive and definitive erythrocytes at the end of maturation / N. Motoyama, T. Kimura, T. Takahashi et al. // J. Exp. Med. 1999. — Vol. 189. — P. 1691-1698.

83. Beroud C., The UMD-p53 database: new mutations and analysis tools / C. Beroud , T. Soussi // Hum Mutat. 2003 — Vol.3. — P. 176-181.

84. BH3 Domains of BH3-Only Proteins Differentially Regulate Bax-Mediated Mitochondrial Membrane Permeabilization Both Directly and Indirectly / T. Kuwana, L. Bouchier-Hayes, C J.E.hipuk et al // Mol Cell. 2005. — Vol.17. -P.525-535.

85. BH3-only Bcl-2 family member Bim is required for apoptosis of autoreactive thymocytes / P. Bouillet, J.F. Purton, D.I. Godfrey et al // Nature. 2002. -Vol.415.-P.922-9266.

86. BH3-only proteins that bind pro-survival Bcl-2 family members fail to induce apoptosis in the absence of Bax and Bak / W.X. Zong, T. Lindsten, A.J. Ross et al. // Genes Dev. 2001. — Vol. 15. — P. 1481-1486.

87. BID regulation by p53 contributes to chemosensitivity / J.K. Sax, P. Fei, M.E. Murphy, E. Bernhard, S.J. Korsmeyer, W.S. El-Deiry //Nat. Cell Biol. 2002. — Vol.4. -P.842-849.

88. Bid-deficient mice are resistant to Fas-induced hepatocellular apoptosis / X.M. Yin, K. Wang, A. Gross A et al. //Nature. 1999.-400. — 886-891.

89. Bonizzi, G. The two NF-kB activation pathways and their role in innate and adaptive immunity / G.Bonizzi, M. Karin // Trends Immunol 2004.-Vol.25.-P.280-288.

90. Borner, C. The Bcl-2 protein family: sensors and checkpoints for life-or-death decisions / Borner C. // Mol Immunol.- 2003.- Vol.39.- P.615-647.

91. Brookes, P.S. Mitochondria: regulators of signal transduction by reactive oxygen and nitrogen species / P.S. Brookes; A.L. Levonen, S. Shiva, P. Sarti et al. // Free Radical Biol. Med. 2002. — Vol.33. — P.755-764.

92. Brooks, C.L. Ubiquitination, phosphorylation and acetylation: the molecular basis for p53 regulation / C.L. Brooks, W. Gu // Curr. Opin. Cell Biol. 2003. -Vol.15.-P. 164-171.

93. Burlacu, A. Regulation of apoptosis by Bcl-2 family proteins / A. Burlacu // J. Cell. Mol. Med. 2003. — Vol.7. — P.249-257.

94. Caelles, A. p53-Dependent apoptosis is not mediated by transcriptional activation of p53-target genes / A.Caelles, M.K. Helmberg // Nature. 1994. -Vol.370.-P.220-230.

95. Cain, K. The Apaf-1 apoptosome: a large caspase-activating complex (Review) / K. Cain, S.B. Bratton, G.M. Cohen // Biochimie.- 2002.- N3.- P. 203-214.

96. Campbell, K.J. Regulation of NF-kB function / K.J. Campbell, N.D. Perkins//Biochem. Soc. Symp.-2006.- Vol.73.-P.165-180.

97. Campbell, K.J. Active repression of antiapoptotic gene expression by ReIA(p65) NF-kB / K.J. Campbell, S. Rocha, N.D. Perkins // Mol. Cell.-2004.- Vol.13.-P.853-865.

98. CDK4 regulation by TNFR1 and JNK is required for NF-kB-mediated epidermal growth control / J.Y. Zhang, S. Tao, R. Kimmel et al. // J. Cell. Biol.-2005.-Vol. 168.- P.561-566.

99. Cell-autonomous Fas (CD95)/Fas-ligand interaction mediates activation-induced apoptosis in T-cell hybridomas / T. Brunner, R. J. Mogil, D. LaFace et al. //Nature.- 1995.-N.2. P. 441-444.

100. Ceramide accumulation precedes caspase-3 activation during apoptosis of A549 human lung adenocarcinoma cells / T. Ravid, A. Tsaba, P. Gee et al. // Am: J. Physiol: Lung. Cell. Mol. Physiol. 2003. — Vol. 284, № 6. — P. 10821092.

101. Characterization of the signal that directs Bcl-xL, but not Bcl-2, to the mitochondrial outer membrane / T. Kaufmann, S. Schlipf, J. Sanz et al. // J Cell Biol. 2003. -Vol. 160. -P.53-64.

102. Chen, L.F. Shaping the nuclear action of NF-kappaB / L.F. Chen, W.C. Greene //Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2004. — Vol.5. — P. 392-401.

103. Chomczynski, P. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction / P. Chomczynski, N. Sacchi// Analytical Biochemestry. 1987. -Vol. 162. -P. 156-159.

104. Comparison of HPV, p53 mutation and allelic losses inposttransplant> and non-posttransplant oral squamous cell carcinomas / L. Zhang, J.B. Epstein, C.F. Poh et al. // J. Oral Path. Med. 2002. — Vol.31. — P. 134-141.

105. Conditional deletion of the Bcl-x gene from erythroid cells results in hemolytic anemia and profound splenomegaly / K.U. Wagner, E. Claudio, E.B. Rucker 3rd et al. // Development. 2000. — Vol.127. — P. 4949-58.

106. Confocal microscopy of the mitochondrial permeability transition in necrotic cell killing, apoptosis and autophagy / J.J. Lemasters, T. Qian, S.P. Elmore et al. // Biofactors.- 1998.- N8.- P. 283-285.

107. Cory, S., The Bel -2 family: regulators of the cellular life-or-death switch / S.Cory, J.M. Adams // Nat Rev Cancer.- 2002,- Vol.2.- P.647-656.

108. Crompton, M. The mitochondrial permeability transition pore and its role in cell death / M. Crompton // J. Biochem.- 1999,- N2.- P. 233-249.

109. Crucial role of the amino-terminal tyrosine residue 42 and the carboxyl-terminal PEST domain of IkB in NF-kB activation by an oxidative stress / S.Schoonbroodt, V.Ferreira, M.Best-Belpomme, et.al. // J. Immunol.-2000-Vol. 164 P.4292-4300.

110. Cytochrome c and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade / P. Li, D. Nijhawan, I. Budihardjo et al. // Cell.- 1997.- Vol. 91.- P. 479-489.

111. Deficiency in Bak and Bax perturbs thymic selection and lymphoid homeostasis / J.C. Rathmell, T. Lindsten, W.X. Zong, et al. // Nat Immunol. — 2002.-Vol.3.-P.932-939.

112. Development and maintenance of B and T lymphocytes requires antiapoptotic Mcl-1 / J.T. Opferman, A. Letai, C. Beard et al. // Nature. 2003. -Vol. 426.-P.671-676.

113. Differential expression of p53 gene family members p63 and p73 in head and neck squamous tumorigenesis / Yang A., Kagdah M., Wang Y., et al. // Human Pathology. Vol.33. — P. 158-164.

114. Differential targeting of pro-survival Bcl-2 proteins by their BH3-only ligands allows complementary apoptotic function / L. Chen, S.N. Willis, A. Wei et al. // Mol Cell. 2005. — Vol. 17. — P.393-403.

115. Dissecting p53 tumor suppressor functions in vivo / C.A. Schmitt, J.S. Fridman, M. Yang, E. Baranov, R.M. Hoffman and S.W. Lowe // Cancer Cell. -2002.-Vol.1.-P.289-298.

116. Distinct BH3 domains either sensitize or activate mitochondrial apoptosis, serving as prototype cancer therapeutics / A. Letai, M. Bassik, L.Walensky et al. // Cancer Cell. 2002. — Vol.2. — P. 183-192.

117. Dumaz, N. p53-serine 15 phosphorylation stimulates the transactivation function of p53 but does not directly influence interaction with HDM2 / N. Dumaz, D.W. Meek // EMBO J. 1999. — Vol.18. — P.7002-7010.

118. Essential role of the> mitochondrial apoptosis-inducing factor in. programmed cell death /N. Joza, S. A. Susin, E. Daugas //Nature.- 2001.- Vol. 410.-P. 549-554.

119. Ferredoxin reductase affects p53-dependent, 5-fluorouracil-induced’ apoptosis in colorectal cancer cells / P.M. Hwang , F. Bunz, G. Yu, Rango C. et al. // Nat.Med. 2001. — Vol.7. — P. 1111 -1117.

120. Fridman, J.S. Control of apoptosis by p53 / J.S. Fridman, S.W. Lowe // Oncogene. 2003. — Vol.22. — P.930-940.

121. Garg, A.K. Reactive oxygen intermediates in TNF signaling / A.K. Garg, B.B. Aggarwal / Mol. Immunol. 2002. — Vol.39. — P.509-517.

122. Genome-wide comparison of human keratinocyte and squamous cell carcinoma responses to UVB irradiation: implications for skin and epithelial cancer / J.E. Dazard, H. Gal, N. Amariglio et al. // Oncogene. 2003. — Vol. 22.-P. 2993-3006.

123. Gottlieb, R.A. Mitochondria: execution central / R.A. Gottlieb // FEBS Lett. 2000.- Vol.482.- P.6-12.

124. Green, D.R. Mitochondria and apoptosis / D.R.Green, J.C.Reed // Science. 1998. — Vol.281. — P. 1309-1312.

125. Green, D.R. The pathophysiology of mitochondrial cell death / D.R. Green, G. Kroemer 11 Science. 2004. — Vol.305. — P.626-629.

126. Green, D.R. A matter of life and death / D. R. Green, G. I. Evan // Cancer Cell.-2002.- N1.- P. 19-30.

127. Growth factor regulation of autophagy and cell survival in the absence of apoptosis / Lum J.J., Bauer D.E., Kong M. et al. // Cell. 2005. — Vol.120. -P.237-248.

128. Guardians of cell death: the Bcl-2 family proteins / P.T. Daniel, K. Schulze-Osthoff et al. // Essays Biochem.- 2003,- Vol.39.- P.73-88.

129. Gudko,v A.V. The role of p53 in determining sensitivity to radiotherapy / A.V. Gudkov, E.A. Komarova // Nat. Rev. Cancer. 2003. — Vol.3. — P. 117129.

130. Haddad, J.J. Pharmaco-redox regulation of cytokine-related pathways: from receptor signaling to pharmacogenetics / J.J.Haddad // Free Radical Biol. Med. 2002. — Vol.33. — P.907-926.

131. Harris, S.L. The p53 pathway: positive and negative feedback loops / S.L. Harris, A.J. Levine // Oncogene. 2005. — Vol.24. — P.2899-2908.

132. Hayden, M.S. Signaling to NF-kB / M.S.Hay den, S.Ghosh // Genes Dev.-2004.- Vol. 18.-P. 2195-2224.

133. Hinds, M.G. Regulation of apoptosis: uncovering the binding determinants / M.G. Hinds, C.L. Day // Curr. Opin. Struct. Biol. 2005. -Vol.15.-P.690-699.

134. Hoffmann, A. Genetic analysis of NF-kB/Rel transcription factors defines functional specificities / A. Hoffmann, T.H. Leung and D. Baltimore // EMBO J.-2003.- Vol.22.-P.5530-5539.

135. Hsu, Y.T. Bax in murine thymus is a soluble monomeric protein that displays differential detergent-induced conformations / Y.T. Hsu, R.J. Youle // J Biol Chem.- 1998. Vol.273. — P. 10777-10783.

136. Huang, D.C.S. BH3-only proteins essential initiators of apoptotic cell death / D.C.S. Huang, A. Strasser // Cell 2000. — Vol. 103. — P. 839-842.

137. Induction of apoptotic program in cell-free extracts: requirement for dATP and cytochrome c / X. Liu, C. Kim, J.Yang et al.// Cell.- 1996.- Vol.86.-N1.-P. 147-157.

138. Integral role of Noxa in p53-mediated apoptotic response / T. Shibue, K. Takeda, E. Oda et al. // Genes Dev. 2003. — Vol. 17. — P.2233-2238.

139. Involvement of MACH, a novel MORTl/FADD-interacting protease, in Fas/APOl and TNF receptor-induced cell death / M. Boldin, T. Goncharov, Y. V. Goltsev, D. Wallach // Cell. 1996. — Vol. 85, № 6. — P. 803-815.

140. Jayadev, S. Elevated ceramide is downstream of altered’ calcium homeostasis in low serum-induced apoptosis / S. Jayadev, J. C. Barrett, E. Murphy // Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2000. — Vol. 279, № 5. frP. 16401647.

141. JNK1 physically interacts with WW domain-containing oxidoreductase (WOX1) and inhibits WOXl-mediated apoptosis / N.S.Chang, J.Doherty, A.Ensign et al. // J. Biol. Chem. 2003. — Vol.278. — P.9195-9202.

142. Johnson, G.L. Mitogen-activated protein kinase pathways mediated by ERK, JNK, and p38 protein kinase / G.L. Johnson, R. Lapadat. // Science. -1998 Vol.298. — P. 1911-1912.

143. Kinyamu, H.K. Estrogen receptor-dependent proteasomal degradation of the glucocorticoid receptor is coupled to an increase in mdm2 protein expression / H.K. Kinyamu, T.K. Archer // Mol. Cell. Biol. 2003. — Vol.23. -P.5867—5881.

144. Kroemer, G. Mitochondrial control of cell death / G. Kroemer, J.C. Reed // Nat Med. 2000. — Vol.6. — P.513-519.

145. Levine, A.J. The P53 pathway: what questions remain to be explored? / A. J. Levine, W. Hu, Z. Feng // Cell Death and Diff. 2006. — Vol.48. — P.456-462.

146. Li, L.Y. Endonuclease G is an apoptotic DNase when released from mitochondria / L. Y. Li, X. Luo, X. Wang // Nature.- 2001. Vol. 412.- P. 9599.

147. Liochev S.I., The effects of superoxide dismutase on H2O2 formation / S.I. Liochev, I. Fridovich // Free Radical Biol Med. 2007. — Vol.42. -P.1465—1469.

148. Loss of the pro-apoptotic BH3-only Bcl-2 family member Bim inhibits BCR stimulation-induced apoptosis and deletion of autoreative B cells / A. Enders, P.Bouillet, H. Puthalakath et al // J Exp Med. 2003. — Vol.198 -P.1119—1126.

149. Lowe, S.W. Apoptosis in cancer. / S.W. Lowe, A.W. Lin // Carcinogenesis. 2000. — Vol. 21. — P.485-495.

150. Lynch, D.H. Fas and FasL in the homeostatic regulation of immune responses / D.H. Lynch, F. Ramsdell, M. R. Alderson // Immunol Today.- 1995 N12.-P. 569-574.

151. Maintenance of the T lymphocyte pool by inhibition of apoptosis: a novel strategy of immunostimulation? / G. Kroemer, N. Zamzami, P. Marchetti et al. // Microbiol Immunol.- 1995.- Vol.- 200. P.223-235.

152. MAP-1 is a mitochondrial effector of Bax / Tan K.O., Fu N.Y., Sukumaran S.K. et al. // Proc Natl Acad Sei USA.- 2005. Vol.10. -P. 14623-14628.

153. Mcl-1 deficiency results in peri-implantation embryonic lethality / J.L. Rinkenberger, S. Horning, B. Klocke et al. // Genes Dev. 2000. — Vol.14. -P.23-27.

154. Mikkelsen, R.B. Biological chemistry of reactive oxygen and nitrogen and radiation-induced signal transduction mechanisms / R.B. Mikkelsen, P. Wardman // Oncogene. 2003. — Vol.22. — P.5734-5754.

155. Mitochondria’ free radicals formation / F. Zoccarato, L. Cavallini, A. Alexandre 11 J.Biol.Chem. 2004. — Vol.279. — P.4166-4174.

156. Mitochondrial dysfunction in the pathogenesis of necrotic and apoptotic cell death / J. J. Lemasters, T. Qian, C. A. Bradham et al. // J. Bioenerg. Biomembr. 1999. — Vol. 31, № 4. — P. 305-319.

157. Mitochondrial permeability transition triggers lymphocyte apoptosis / P. Marchetti, T. Hirsch, N. Zamzami et al. // J Immunol.- 1996.- N11.- P. 48304836.

158. Moll, U.M. p53, p63 and p73—solos, alliances and feuds among family members / U.M. Moll // Biochim Biophys Acta. 2001 — Vol. 1552. — P.47-59.

159. Multiple Bcl-2 family members demonstrate selective dimerizations with Bax / T.W. Sedlak, Z.N.Oltvai, E. Yang et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. -1995: Vol. 92. — P.7834-7838.

160. Nagata, S. Apoptosis by death factor / S.Nagata // Cell. 1997.- Vol.88. — P.355-365.

161. Nakano, K. PUMA, a novel proapoptotic gene, is induced by p53 / K. Nakano, K.H. Vousden // Mol Cell. 2001. — Vol.7. — P.683-694.

162. Newmeyer, D.D. Mitochondria: releasing power for life and unleashing the machineries of death / D.D. Newmeyer, S. Ferguson-Miller // Cell. 2003. -Vol.112.-P.481-490.

163. NF-kB and IaB are found in the mitochondria. Evidence for regulation of mitochondrial gene expression by NF-kB. / P.C. Cogswell, D.F. Kashatus, J.A. Keifer et al. // J. Biol. Chem 2003.- Vol.278.- P.2963-2968.

164. NF-kB and JNK: an intricate affair / C. Bubici, S. Papa, C.G. Pham // Cell Cycle. 2004. — Vol.3. — P. 1524-1529.

165. NF-kB blockade and oncogenic Ras trigger invasive human epidermal neoplasia / M. Dajee, M. Lazarov, J.Y. Zhang et al. // Nature. 2003. -Vol.421. -P.639-643.

166. Noxa, a BH3-only member of the Bcl-2 family and candidate mediator of p53-induced apoptosis / E. Oda, R.Ohki, H.Murasawa et al. // Science. -2000. Vol.288. -P.1053-1058.

167. Obligate role of anti-apoptotic Mcl-1 in the survival of hematopoietic stem cells / J. Opferman, H. Iwasaki, C.C. Ong et al. // Science. 2005. -Vol.307.-P.l 101-1104.

168. Oligomeric Bax is a component of the putative cytochrome c release channel MAC, mitochondrial apoptosis-induced channel / L.M. Dejean, S. Martinez-Caballero, L.Guo et al. // Mol Biol Cell. 2005. — Vol.16. — P.2424-2432.

169. Oncogenic ras and p53 cooperate to induce cellular senescence / G. Ferbeyre, E. de Stanchina, A.W. Lin et al. // Mol Cell Biol. 2002. — Vol.10. -P.3497-3508.

170. Oren, M. Decision making by p53: life, death and cancer / M. Oren // Cell Death Differ. 2003. — Vol. 10. — P.431-442.

171. Oscillations in NF-kB signaling control the dynamics of gene expression / D.E. Nelson, A.E. Ihekwaba, M. Elliott // Science.- 2004.- Vol.306.- P.704-708.

172. Pahl, H.L. Activators and target genes of Rel/NF-B transcription factors / H.L. Pahl // Oncogene. 1999. — Vol. 18. — P.6853-6866.

173. Peers, C. Acute oxygen sensing: Diverse but convergent mechanisms in airway and arterial chemoreceptors / C. Peers, P.J. Kemp //Respir Res. 2001.- Vol.2.-P.145-149.

174. Perkins, N.D. Achieving transcriptional specificity with NF-kB / Perkins N.D.// Int. J. Biochem. Cell. Biol.- 1997.- Vol.29.-P. 1433-1448.

175. Perkins, N.D. NF-kB: tumor promoter or suppressor? / N.D. Perkins // Trends Cell Biol.- 2004.- Vol.14.- P.64-69.

176. Perkins, N.D. Good cop, bad cop: the different faces of NF-B / N.D. Perkins, T.D. Gilmore // Cell Death and Differentiation.- 2006.- Vol. 10.-P.1038.

177. Phosphorylation of NF-kB and IkB proteins: implications in cancer and inflammation / P.Viatour, M.P. Merville, V. Bours et al. // Trends Biochem. Sci.-2005,-Vol.30.- P.43-52.

178. Porwol, T. Tissue oxygen sensor function of NADPH oxidase isoforms, an unusual cytochrome aa3 and reactive oxygen species / T. Porwol, W. Ehleben, V. Brand, H. Acker // Respir Physiol. 2001. — Vol.128. — P.331-348.

179. Possible new role for NF-kB in the resolution of inflammation / T. Lawrence, D.W. Gilroy, P.R. Colville-Nash et al. // Nat Med.- 2001.- Vol.7.-P.1291—1297.

180. Post-translational modification of RelA (p65) NF-kB / K.J. Campbell, N.D. Perkins // Biochem. Soc. Trans.- 2004.- Vol.32.- P.1087-1089.

181. Prives, С. The p53 pathway / C. Prives, P.A. Hall, // J. Path. 1999. -Vol.187.-P.l 12-126.

182. Pro-apoptotic Bak is sequestered by Mcl and Bcl-xL, but not Bcl-2, until displaced by ВНЗ-only proteins / Willis S.N., Chen L., Dewson G. et al. // Genes Dev. 2005. — Vol.l9. — P.1294-1305.

183. Pro-apoptotic Bax and Bak: a requisite gateway to mitochondrial dysfunction and death / Wei M.C., Zong W.X., Cheng E.H. et al. /ЛScience. -2001. Vol.292. — P.727-730.

184. Pro-apoptotic Bcl-2 relative В im required for certain apoptotic responses, leukocyte homeostasis, and to preclude autoimmunity / P. Bouillet, D. Metealf, D.C.S. Huang et al. // Science. 1999. — Vol. 286. — P. 1735-1738.

185. Properties of the permeability transition pore in mitochondria devoid of cyclophilin D / E.Basso, L.Fante, J.Fowlkes et al. // J. Biol Chem. 2005. -Vol.280. -P.18558-18561.

186. Protein kinase CK2 promotes aberrant activation of nuclear factor-kB, transformed phenotype, and survival of breast cancer cells / R. Romieu-Mourez, E. Landesman-Bollag, D.C. Seldin et al. // Cancer Res.- 2002.- Vol. 62.- P. 6770-6778.

187. Puma induces the rapid apoptosis of colorectal cancer cells / J. Yu, L. Zhang, P.M. Hwang et al. // Mol Cell. 2001. — Vol.7. — P.673-682.

188. Puma is an essential mediator of p53-dependent and -independent apoptotic pathways / Jeffers J.R., Parganas E., Lee Y. et al. // Cancer Cell. — 2003. Vol.4. — P.321—328.

189. Ranger, A.M. Mouse models of cell death / A.M. Ranger, B.A. Malynn, S.J. Korsmeyer //Nat Gen.-2001.- Vol.28.-P. 113-118.

190. Rationale, for Bcl-xL/Bad peptide complex formation from structure, mutagenesis, and biophysical studies / A.M. Petros, D.G. Nettseheim, Y. Wang et al. // Protein Sci. 2000. — Vol.9. — P.2528-2534.

191. Reactive oxygen species promote TNFa-induced death and sustained JNK activation by inhibiting MAP kinase phosphatases / H. Kamata, S. Honda, S. Maeda et al. // Cell.- 2005.- Vol.120.-P.649-661.

192. Reciprocal inhibition of p53 and nuclear factor-kappaB transcriptional activities determines cell survival or death in neurons / C. Culmsee, J. Siewe, V. Junker et al. // J. Neurosci. 2003. — Vol.23. — P.8586-8595.

193. Regulation of NF-kB and p53 through activation of ATR and Chkl by the ARF tumour suppressor / S. Rocha, M.D. Garrett, KJ. Campbell et al. // EMBO J. 2005. — Vol.24. — P. 1157-1169.

194. Regulation of p53 by hypoxia: dissociation of transcriptional repression and apoptosis. from p53-dependent transactivation / C. Koumenis, R. Alarcon, E. Hammond, P. Sutphin et al. // Mol. Cell Biol. 2001. — Vol.21. — P. 12971310.

195. Regulation of p53 stability and p53-dependent apoptosis by NADH quinone oxidoreductase 1 / G. Asher, J Lotem, B.Cohen, L. Sachs, Y. Shaul // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. — Vol.98. — P.l 188-1193.

196. Rhabdomyosarcoma cell lines are resistant to Fas- and highly sensitive to TRAIL-induced apoptosis / I. Petak., D.M. Tillman, F.G. Harwood et al. // Clin. Cancer Res. 2000. — Vol.6. — P.4432-4441.

197. Rocha, S. p53- and Mdm2-independent repression of NF-kB transactivation by the ARF tumor suppressor / S. Rocha, K.J. Campbell, N.D. Perkins //Mol. Cell. -2003. -Vol. 12.-P. 15-25.

198. Role of the stress-activated protein kinases in endothelin-induced cardiomyocyte hypertrophy / G. Choukroun, R. Hajjar, J. M. Kyriakis et al. // J. Clin. Investig. 1998. — Vol.102. — P. 1311-1320.

199. Roles of nuclear factor kB in neuronal survival and plasticity // M.P. Mattson, C. Culmsee, Z. Yu, S. Camandola // Int. Soc. for Neurochem. 2000. — Vol.5.-P.238-247.

200. Saccani, S. Modulation of NF-kB activity by exchange of dimmers / S. Saccani, S. Pantano, G. Natoli//Mol. Cell.- 2003.-N.il.- P.1563-1574.| ‘

201. Saccani, S. p38-dependent marking of inflammatory genes for increased NF-kB recruitment / S. Saccani, S. Pantano, G. Natoli // Nat. Immunol.- 2002.-N3.- P. 69-75

202. Schuler, S. Mechanisms of p53-dependent apoptosis / S. Schuler, D. Green // Biochem Soc Trans. 2001. — Vol.29. — P.684-688.

203. Seoane, J. Myc suppression of the p21(Cipl) Cdk inhibitor influences the outcome of the p53 response to DNA damage / J. Seoane, H.V. Le, J. Massague //Nature. 2002. — Vol.419. — P.729-734.

204. Shimizu, S. Bcl-2 family proteins regulate the release of apoptogenic cytochrome c by the mitochondrial channel VDAC / S. Shimizu, M.Narita, Y. Tsujimoto //Nature. 1999. — Vol.399. — P.483-487.

205. Shut down of an acute T cell immune response to viral infection is mediated by the pro-apoptotic Bcl-2 homology 3-only protein Bim / M.Pellegrini, G.Belz, P.Bouillet et al. // Proc Natl Acad Sei USA.- 2003. -Vol. 100 P. 14175-14180.

206. Smac, a Mitochondrial Protein that promotes Cytochrome c-Dependent Caspase Activation by Eliminating IAP Inhibition / C. Du, M. Fang, Y. Li et al. // Cell.- 2000.- Vol. 102.- P.33-42.

207. Solution structure of the anti-apoptotic protein Bcl-2 / A.M. Petros, A. Medek, D.G. Nettesheim et al. // Proc Natl Acad Sei USA.- 2001. Vol.98. -P.3012-3017.

208. Stark, L.A. Nucleolar sequestration of RelA (p65) regulates NF-kB-driven transcription and apoptosis / L. A. Stark, M.G. Dunlop // Mol. Cell. Biol.- 2005.- Vol. 25.- P.5985-6004.

209. Steinman, H.M. The Bcl-2 oncoprotein functions as a pro-oxidant. J. Biol. Chem.- 1995,- Vol. 270.- 3487-3490.

210. Structural basis of IAP recognition by Smac/DIABLO / G. Wu, J. Chai, T.L. Suber et al. //Nature.- 2000.- Vol. 408.- P. 1008-1012.

211. Structure of Bcl-xL-Bak peptide complex: recognition between regulators of apoptosis / M. Sattler, H.Liang, D.Nettesheim et al. // Science. -1997. Vol.275. — P.983-986.

212. Susin, S.A. Mitochondria as regulators of apoptosis: doubt no more / S.A. Susin, N. Zamzami, G. Kroemer // Biochim Biophys Acta. 1998. -Vol.1366. -P.l 51-165.

213. Suzuki, M. Structure of Bax: coregulation of dimer formation and intracellular localization / M.Suzuki, R.J. Youle, N.Tjandra // Cell. 2000. -Vol.103.-P.645-654.

214. Testicular degeneration in Bcl-w-deficient mice / A.J. Ross, K.G. Waymire, J.E. Moss et al. //Nat Gen. 1998. — Vol.18.- 251-256.

215. The combined functions of pro-apoptotic Bcl-2 family members Bak and* Bax are essential for normal development of multiple tissues / T. Lindsten, A.J. Ross, A. King, et al. // Mol Cell. 2000. — Vol.6. — P. 1389-1399.

216. The p53 MH algorithm and its application in detecting p53-responsive genes / J. Hoh, S. Jin, T. Parrado et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. -Vol.99. — P. 8467-8472.

217. The structure of a Bcl-xL/Bim fragment complex: Implications for Bim function / X. Liu, S. Dai, Y. Zhu et al. // Immunity. 2003 — Vol.19. — P.341-352.

218. The ubiquitin ligase COP1 is a critical negative regulator of p53 / D. Dornan, I. Wertz, H. Shimizu, D. Arnott et al. // Nature. 2004. — Vol.429. -P.86-92.

219. Thornberry, N.A. Caspases: enemies Within / N.A. Thornberry, Y. Lazebnik, //Science. 1998.-Vol.281.-P.1312-1316.

220. To be, or not to be: NF-kB is the answer role of Rel/NF-kB in the regulation of apoptosis / J. Kucharczak, M:J. Simmons, Y.J, Fan et al. // Oncogene.- 2003,- Vol.22.- P.8961-8982.

221. Transcriptional repression of the anti-apoptotic survivin gene by wild type p53 / W.H. Hoffman, S. Biade, J.T. Zilfou, J. Chen et al. // Biol. Chem. -2002. Vol.277. P.3247-3257.

222. Transcription-independent pro-apoptotic functions of p53 / U.M. Moll, S. Wolff, D. Speidel, W. Deppert // Curr. Opin. Cell Biol. 2005. — Vol.17. -P.631-636.

223. Tsujimoto, Y. Role of Bcl-2 family proteins in apoptosis: apoptosomes or mitochondria? / Y. Tsujimoto // Genes to Cells 1998. — Vol.3. — P.697-707.

224. Tumor necrosis factor receptor 1-mediated signaling is required for skin cancer development induced by NF-kB inhibition / M.H. Lind, B. Rozell, R.P. Wallin et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2004.- Vol.101.- P.4972-4977.

225. Tyrosine phosphorylation of IB-a activates NF-kB without proteolytic degradation of IkB-a / V.I mbert, R.A.Rupec, A.Livolsi, et.al. // Cell.- 1996 — Vol. 86,- P.787-798.

226. VDAC2 inhibits BAK activation and mitochondrial apoptosis / Cheng E.H., Sheiko T.V., Fisher J.K. et al. // Science. -2003. Vol.301. -P.513-517.

227. Wenger, R.H. Mammalian oxygen sensing, signaling and gene regulation / R.H. Wenger // Exp Biol. 2000. — Vol.23. — P.1253-1263.

228. Xia, L. p53 Activation in Chronic Radiation-Treated Breast Cancer Cells: Regulation of MDM2/p 14ARF / L. Xia, A. Paik, J. J. Li // Cancer Res. -2004. Vol.64. P.221-228.

229. Yeh, W.-C. FADD: essential for embryo development and signaling from some, but not all / W.-C. Yeh, J. L, Pompa, M. E. McCurrach // Science. -1998. Vol. 279, № 5358. — P. 1954-1958.

230. Zhou, J. Replication of damaged DNA in vitro is blocked by p53 / J. Zhou, C. Prives //Nucleic Acids Research. 2003. — Vol.31. -P.3881-3892.

231. Zhu, H. Signal transduction. How do cells sense oxygen? / H. Zhu, H.F. Bunn // Science. 2001. — Vol.292. — P.449-451.

В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.

www.dissercat.com

About : admin